Die Aufgabenstellung:
2♦
Die Klonierung dient der Vermehrung eines DNA-Abschnittes. Ihre Vorteil bestehen einerseits in der Möglichkeit, dass längere DNA-Abschnitte als bei der PCR kopiert werden können. Andererseits wird kein Primer benötigt, wodurch unbekannte DNA-Abschnitte kopiert werden können. Die Nachteile dieser Methode ergeben sich aus der Tatsache, dass lebendige Wirtszellen (Bakterienzellen) benötigt werden und sie wesentlich länger dauert (Wochen bis Monate) als die PCR.
Bringe die Schritte eines typischen Klonierungsprozesses in die richtige Reihenfolge:
A:
Zum gewünschten DNA-Abschnitt, der eingefügt werden soll, können bei Bedarf auch Genmarker eingefügt werden.
B:
Rekombinante Bakterien entstehen durch die Übertragung des Plasmids in eine Bakterienzelle.
C:
Das ringförmige Plasmid wird mit einem Restriktionsenzym geöffnet.
D:
Ligasen fügen den gewünschten DNA-Abschnitt in die offenen Plasmide ein und schließen den DNA-Ring wieder.
E:
Über den Gen-Marker werden jene Bakterienkulturen ausgewählt, die das Plasmid aufgenommen haben. Teilen sie sich, vermehren sie auch den gewünschten DNA-Abschnitt.
F:
Dieses um die gewünschte DNA-Sequenz ergänzte Plasmid wird nun "rekombinantes" Plasmid genannt.
G:
Aus einer Bakterienzelle wird ein Plasmid isoliert, welches als Vektor dienen soll.
H:
Haben sich die Bakterien ausreichend vermehrt, kann dann das Plasmid aus den Bakterien extrahiert und das DNA-Stück durch Restriktionsenzyme wieder isoliert werden.
I:
Aus einem anderen Organismus wird durch Restriktionsenzyme der gewünschte DNA-Abschnitt herausgeschnitten.
Gib die richtige Buchstabenfolge ohne Abstände an (z.B. "ABCDEFGHI"):
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